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            威斯騰公眾號

            文庫構建服務
            基因組文庫(Genomic Library)構建

            時間:2020-07-21 15:37:00 瀏覽:4073次


            簡介:用限制性內切酶切割細胞的整個基因組DNA,可以得到大量的基因組DNA片段,然后將這些DNA片段與載體連接,再轉化到細菌中去,讓宿主菌長成克隆。這樣,一個克隆內的每個細胞的載體上都包含有特定的基因組DNA片段,整個克隆群體就包含基因組的全部基因片段總和稱為基因組文庫?;蛭膸欤交蚪M文庫+cDNA文庫 。

            基因組文庫構建步驟:

            1、載體:
            噬菌體:48.5kb,插入型(最多可容納9kb)、取代型(可容納 38-51kb,最適19-20kb), EMBL, Charon 粘性質粒(Cosmid):4-6kb, 質粒+噬菌體的性質,可容納大片段的外源基因,最多可容納46kb。
            酵母人工染色體克隆體系(YAC,Yeast Artificial Chromosome   Cloning System) 插入大小200—1000kb

            2、載體DNA的制備: 高分子量的外源DNA 100-150kb
            載體DNA酶切反應-----載體臂的純化-----載體脫磷處理 (常用BamHI)   (蔗糖密度梯度離心)  (堿性磷酸酶)

            3、連接和包裝:外源片段與兩臂之間的比例,包裝蛋白
            4、感染宿主菌:選擇合適的宿主菌,LE392, NM538, NM539, KW251等
            5、基因組文庫的保存和擴增
            6、測滴度:106fu以上

            7、保存:氯仿4℃,7% DMSO -70℃

            客戶提供:

            動物的血或細胞、新鮮植物葉片、活體昆蟲或純化好的DNA樣品。

            公司提供:

            1、文庫(10%甘油菌)以及菌落效價(CFU/ml);

            2、隨機抽樣測序結果。

            服務流程


            服務項目

            分子生物學類蛋白質與免疫學動物實驗
            實時熒光定量PCR單克隆抗體制備帕金森疾病模型
            免疫共沉淀(Co-IP)多克隆抗體制備抑郁癥動物模型
            ELISA(酶聯免疫吸附法)技術Western-blot 實驗服務脊髓損傷模型
            生化指標檢測蛋白雙向電泳實驗服務腦外損傷模型
            雙熒光素酶報告基因檢測原核蛋白表達純化骨神經損傷模型
            染色質免疫共沉淀(ChIP)真核蛋白表達純化心肌缺血模型
            GST pull DownITRAQ定量蛋白質組學心力衰竭模型

            SLAC蛋白組學肺動脈高血壓動物模型


            高血壓模型
            病毒類實驗課題整體外包粥樣動脈硬化模型
            過表達/干擾慢病毒包裝純化整體課題外包大腦中動脈阻塞模型
            過表達/干擾腺病毒包裝純化細胞整體實驗外包慢性之氣管炎模型
            逆轉錄病毒包裝純化動物整體實驗外包過敏性哮喘模型
            腺相關病毒包裝純化
            肺炎大鼠模型


            肝炎-肝硬化-肝癌模型
            蛋白芯片原代細胞培養肝纖維化模型
            細胞因子芯片骨髓間充質干細胞培養膽結石模型
            生長因子芯片脂肪干細胞培養急性胰腺炎模型
            信號通路磷酸化水平檢測芯片心肌成纖維細胞培養急性腎衰竭模型
            BioPlex懸浮芯片軟骨細胞培養體內血栓模型
            生長因子芯片血管內皮細胞培養關節炎模型
            炎癥因子芯片神經元細胞培養I型和II型糖尿病模型
            血管生成因子芯片內皮組細胞原代培養裸鼠成瘤
            凋亡因子芯片
            基因編輯動物
            趨化因子芯片電生理相關服務動物整體實驗服務
            HuProt TM 20K人類蛋白組芯片膜片鉗實驗
            細胞生物學高通量測序代謝組學
            細胞原代培養mRNA測序氣相色譜GC/MS
            MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
            細胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
            細胞周期檢測RNA-Seq測序
            細胞克隆形成實驗外顯子測序影像學相關實驗
            Transwell細胞遷移/侵襲16s擴增子測序Micro-CT
            流式分選Small RNA測序小動物活體成像
            CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
            臺盼藍檢測細胞活性單細胞測序PET-CT
            藥物篩選細胞學實驗circleRNA測序
            細胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
            細胞劃痕實驗
            條件性敲除小鼠/大鼠
            細胞生物學整體實驗
            全基因敲除小鼠/大鼠
            細胞成管實驗

            病理類CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入基因芯片
            掃描電鏡基因定點突變細胞系LncRNA芯片
            透射電鏡單基因敲除細胞系miRNA芯片
            HE染色多基因敲除細胞系mRNA芯片
            免疫組化目的基因敲入細胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
            Tunel(原位末端凋亡法)檢測報告基因敲入細胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
            激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細胞系
            免疫熒光

            Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
            原位雜交基因敲除大鼠/小鼠
            熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠
            特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)

            行為學檢測藥物篩選服務項目藥效學評價
            水迷宮實驗高通量自動藥物篩選平臺神經系統藥物藥效學評價
            曠場實驗細胞高內涵藥物篩選平臺抗腫瘤藥物藥效學評價
            重復性刻板行為檢測蛋白質組學靶標研發平臺心血管系統藥物藥效學評價
            動物跑臺檢測分子藥理研究平臺泌尿系統藥物藥效學評價
            強迫游泳生物膜片鉗藥物篩選平臺內分泌系統藥物藥效學評價

            常規藥物體外篩選抗炎免疫藥物藥效學評價


            【本平臺合作項目】
            分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務!
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